[비긴랩 서울캠퍼스] 바이오제약 취업 부트캠프 3주차 후기

안녕하세여 3주차가 마무리 되었습니다~!! 
지금은 주차별로 어떻게 이어지는지만 파악해도 저는 정말로 열심히 하고있다고 생각합니다..ㅠㅠㅠㅠ
거두절미하고 이번주는 단백질을 발현하는 한 주를 보냈어요

7월 21일(월) 11일차

오전에는 primer design 조별 확인 및 피드백시간을 가졌어요
primer 디자인시 길이와 Tm값, GC의 비율, 3' 말단이 A-T로 구성됐는지, Dimer, Hairpin을 잘 고려했는지
점검하면서 피드백을 받았어요
다른 조들은 멘토님이 제시해준 제한효소를 하셨는데 저희조만 다른 제한효소를 사용해봤는데 도전적이지만 그래도 호평을 받았어요 ㅎㅎ
오후에는 DH5- α pET24(m)a transformation을 위한 spreading을 진행했어요

그리고 일주일이 지났으니  DH5- α , BL21 배지들 subculture해주고 지난 주에 했던 BL21 plasmid transformation, DH5- α plasmid transfromation 배지들 subculture하고
Running buffer 용액 제조 계산만 하고서
수업을 마쳤습니다 ㅎㅎ 

7월 22일(화) 12일차

배지를 확인해봤는데 single colony가 나쁘지않게 보였어요! 4번 구역이 조금 자리가 없긴했어요 흠..ㅎ
streaking을 조금 더 잘할 수 있는 내가 되길~!
확인 이후에 colony PCR을 진행했어요 

DH5- α transformation과정에서 GFP를 넣은거랑 안넣은 배지를 비교해서 전기영동에서 단백질이 확인되는지 검사해볼건데
저번주 금요일과 같은 PCR mix components이지만 거기에서 Tamplate대신 Colony를 팁으로 따서 섞어주는 과정으로 확인이 됩니다.

전기영동확인 후 띠가 안뜨는 것이 GFP가 들어있지 않은거여서 단백질 유무를 알 수 있습니다 ㅎㅎ

그래서 단백질을 확인했으니 본격적으로 BL21 -GFP
seed culture하고 subculture을 위해서 배지만들고 autoclave돌리고 집갔엉용

7월 23일(수) 13일차

단백질 발현 cell을 만들건데 bL21에 gfp단백질을 투여하고 seedculture 한 배지를 본격적으로 subculture 용액을 만들었어요

배양이 잘되었어용

0.6 OD값을 만들려고했는데 6시간반정도가 걸렸어요 흠,,,보통은 4시간~5시간정도 걸린다는데 많이 오바됐군요ㅠㅠㅠ

아무튼 BL21 control 배지와 함께 0.6OD값을 만든 후 IPTG를 투여했습니다

IPTG 투여하는 이유!

그리고 running buffer 제작하고
SDS PAGE에 대해 공부했답니다

이론중에서 GPF발현시 해야할 2가지를 공부했는데 추출(expression)과 다음주에 있을 정제(purification) 입니다
그래서 정제시 필요한 buffer가 여러개 있는데 미리 제작을 했어요
버퍼이름

7월 24일(목) 14일차

 

오전에는 protein expression을 진행했답니다

그래서 단백질 중 soluble과 insoluble fraction을 분리하는 작업을 거쳤어요

soluble insoluble 구분하는이유

soluble 용액에는 insoluble 용액이 안들어가게 최대한 분리

우리는 soluble fraction을 가지고
SDS PAGE를 확인 해보려고요~~!
그래서 금요일에 사용할
SDS PAGE를 위한 GEL을 제작했어요 (12%Polyacrylamide gel)
이 gel만드는데.. 갱장한 시간이 걸렸어여 ㅋㅋㅋㅋ다행히 저흰 1트에 제작 완료했지만 실패했던 조도있어서ㅠ 마음이 아팠어여

이 용액을 잘 제조했어도 문제!! 유리판 끼우는데도 심혈을 기울여야혀요 잘못끼우면 세어나오므로 매우 큰일..ㅠㅠ
저는 몇번 만져보니 터득할 수 있었어요 휴휴 다행

아무튼 야무지게 잘 만들고 나서 마르지않게 dw뿌리고 냉장보관 해주었답니다~~!

그리고 loading dye도 제작완료~ 10개로 소분해줬습니돠
사진

7월 25일(금) 15일차

 

드디어 단백질 전기영동의 시간이 다가왔습니다!!
적정량의 sample buffer와 분리된 단백질 샘플(soluble)을 준비했어요
사진??
단백질sample과 어제 만들어둔 loadind dye를 혼합하여 boiling 100도에서 10분정도, 단백질에 열을 가해서 구조가 좀 풀리게 해주었어요 이후에 centrifuge 잠시 돌려줬어요

 

SDS PAGE는 Electrophoresis 장치로 해줍니다

이후에 똑같이 전기영동하듯이 loading해주면 되는데.. 하 이건 입구가 더 작아서 용액 주입할때 너무 고통스러웠어요 ㅋㅋㅋ

입구가 잘안보임.. 아무튼 감을 잘 찾는게 중요하답니다..ㅠㅠ 조원이 도와줘서 어찌저찌 잘 주입은 했어용ㅎㅎ

이거는 끝까지 다 내려줘야 해서 점심시간쯤 전기영동 시작했는데도 시간이 3시까지?정도 꽤 오래걸렸답니다.
전기영동 완료후 단백질 확인을 위해 staining(30분) de-staining (30분) 해줬어요 ㅎㅎ

결과를 보면 GFP파일에서도 볼 수 있듯 단백질 크기에 따라서 어떤 단백질로 분리됐는지 유추해 볼 수 있답니다
4주차 단백질 정제에서 만나영

일자별로 내용이 부족해서 개념추가 등 좀 더 쓸말이 많은데 곧 정리해오겠습니다~