[비긴랩 서울캠퍼스] 바이오제약 취업 부트캠프 4주차 후기

안녕하세여
긴듯 짧았던 한달이 또 지나갔습니다
그거슨 즉슨......👀
종강을 했단 말입니다...!!!!

어찌저찌 정말 잘 버텨서 기쁩니다 ㅎㅎㅎㅎㅎㅎㅎ
역시 최강 조원들을 만나서 편하게
별탈없이 잘 마무리 할 수 있었어요😭

사실상 월,화 이틀하면 정규과정은 끝이랍니다 ㅎㅎ
이후에는 HPLC 특강과 커리어코칭만 남아있어용ㅎ

7월 28일(월) 16일차

오전에는 12% acryl amide gel을 또 만들겁니다
저번주랑 다른점은 그땐 gfp말고도 다른 단백질들이 뜨는걸 확인할 수 있었는데
오늘은 뭐다? purification을 진행한다~
그래서 전기영동시 단일 띠가 나오도록..
열심히 gfp만 걸러보겠습니다..!

사용한 것으로는 Ni-NTA resin 이 들어있는 colunm를 이용해서 gravity colunm을 진행한답니다
가급적이면 수평을 유지하도록 해줘야하고
여러 버퍼들을 이용해 정제해줍니다

 

gfp단백질 걸르러 가보자고~~~~!!!

조금 웃기긴하지만 어릴적 피아노 학원 다닐때  횟수 적는것 처럼 binding buffer 2ml x10
wash buffer 2mlX20
후 Elution buffer로 정제된 gfp 획득

이후 MES버퍼, DW작업 뒤
처음 레진 상태로 되돌려서 재사용이 가능하도록 해줄겁니다( 근데 나만 망가트린거 안비밀 ㅠㅜ 이거 아주 섬세하게 풀어주셔야함용 갑자기 겔화 되는바람에 피펫 막혀서 사용하지 못하게 됐어요 죄송합니다..!)

정제된 gfp 획득

가장 왼쪽 노란 것으로 전기영동 내릴거에요
그래서 하루종일 정제하는 날이었다고 보시면 되겠습니다!

7월 29일(화) 17일차

이제 열심히 단백질을 정제했으면 뭐해야한다?
정량을 알아봐야한다~~~~!!
그래서 정제한 샘플의 농도를 알아보기위해
bradford assay를 진행했답니다

1. 염료 사용: Coomassie Brilliant Blue G-250
원래 적갈색인데 단백질(특히 아르지닌 잔기)에 결합하면 푸른색으로 바뀜.
단백질이 많을수록 더 진한 파란색 → 흡광도(OD) 증가

Coomassie Brilliant Blue G-250

2. 측정 파장: 595nm
파란색으로 변한 염료의 흡광도 측정
큐벳에 넣을 때 시료 구분잘하기

잠깐,, 흡광도 측정시 blank는 DW(단백질0)에 시료를 더한것으로 해줘야함...... 그게 기준인데ㅜㅜ참
안일했다...😂 1번 값으로 빼면서 보정을 해주었습니다아..

3. 표준 곡선 사용
GFP단백질로 농도 별로 OD를 측정해서 standard curve 만듦.
내 샘플도 OD 측정 → 표준곡선에 대입해서 역산해서 농도 계산함
보통 정비례함

원칙!
적어도 sample이 standard curve범주 안에 들어와야함. 흡광도가 아득히 위에 있으면 물과 희석해서 낮춘후 원래 희석한 만큼 배수로 되돌려놓으면 됨.

저희는 바화기 기준으로 실험진행했어여~

왼쪽부터 차례대로 0, 0.02, 0.04, 0.06 (mg/ml)

이렇게 용액제조하고 10분정도 반응시켜주고 흡광도측정해서 standard curve 돌리면됩니다요

아무튼 간에 선형방정식 구하니
제 gfp단백질의 농도가 나왔고
희석배수를 다시 곱해줘서 MV=M'V'공식 써서
원액의 농도 x (구할값: 원액에서 사용할부피)
= 희석후 원하는 농도200 x 최종부피 100
해서 사용할 원액농도 구한다음
나머지는 DW로 채워주었습니다

그렇게해서 이제....
전기영동에 내려주었습니다

전기영동에 들어갓!!!!!!

running gel에서 steaking gel로 넘어갈때 120V로 올려줘요

시료가 다 내려왔으면 staining 해줄건데
이번엔 overnight 해줄거에요!!!

그리고 그만큼 destaining도 조금 오래 해주면됩니다

7월30일(수) 18일차

다음날 시간도 많은겸 destaining도 오래해줬더니 이쁘게 잘나왔어요
어때요..? 살짝 덜 정제된 부분도 있지만
그래도 거의 gfp만 잘 정제했다고 보면되겠죠👀👀

무튼 이렇게 단백질 정제까지의 여정을 마쳤습니다..!

정규과정은 여기서 끝!!
수목 HPLC 특강은 덧붙여 빠른시일 내 다시 추가하겠습니다ㅎㅎㅎㅎ

아무튼 보람찬 한달이었구요🥹

QC 직무에 대해 많이 고민했는데 저도 할 수 있겠다는 실낱 같은 희망이 생겨서 기뻤어요...!
커리어특강까지 듣고 성실히 취준해서 좋은 결과로 또 글을 올릴 수 있길 기대해봅니다❤️❤️

멘토님들과 함께 끝까지 해준 교육생분들 모두
고생많으셨습니다🎶😍 모두 다 잘되시길✨